基于大肠杆菌的无细胞快速蛋白表达系统​：myTXTL无细胞体外蛋白表达系统（Arbor Biosciences中国代理）

在大肠杆菌蛋白表达实验中，我们经常会遇到蛋白表达不出来、表达出的蛋白没有活性、蛋白表达过程中容易形成包涵体等情况，还要分析出现这些情况的原因。1、目的蛋白不适合在大肠杆菌中表达。包括稀有密码子、mRNA结构、跨膜区等；2、表达条件需要进一步优化。比如温度、分子伴侣、适合的表达宿主等；3、采用哪种温和复性条件可以提高蛋白活性，减少包涵体的形成等等。

除此之外，几乎每出一点差错就需要重新开始实验，表达载体的构建、感受态细胞的转化、阳性克隆的鉴定、培养基的配制、小量诱导摸条件、大量诱导、离心富集细胞、超声裂解细胞、亲和富集与纯化。又需要额外花费一周、几周甚至半年的时间，时间成本高到让人心烦不已。

现在有一个新技术：myTXTL无细胞蛋白表达技术，这个技术可以替代原核细胞大肠杆菌表达系统，可以解决蛋白表达不出来、表达的蛋白没有活性、原核蛋白表达产物有包涵体的问题。除此之外，这个技术能够应用于可溶蛋白和膜蛋白表达、蛋白质功能鉴定、高通量筛选、分子间互作分析。还适用于在大肠杆菌中难以表达的蛋白质、蛋白质分子定向进化、噬菌体生产、基因调控网络构建、基础研究（比如，CRISPR系统鉴定）、蛋白-蛋白互作、蛋白-核酸互作、蛋白与小分子的相互作用、酶活检测等。

myTXTL 体外蛋白表达系统的特点：

myTXTL 是一种简单快速的蛋白质体外表达系统。基因的转录(Transcription, TX)和翻译(Translation, TL)基于大肠杆菌的内源TXTL机制，在体外建立高效的无细胞反应体系。同时，又保证了T7表达系统的兼容性。

myTXTL体外蛋白表达系统操作简单，仅需将线性模板或质粒与myTXTL Master Mix混匀，目标蛋白在数小时内即可表达出来。不需要转化、克隆筛选和细胞裂解，避免了包涵体的形成。同时，避免了产物纯化过程中目标蛋白的损失。

myTXTL蛋白表达系统一次实验可对多个样品进行操作，小的反应体系是12 l，表达出来的蛋白浓度能达到1 g/ L，反应体系可等比例扩大。

反应系统里添加了7种大肠杆菌稀有密码子，去除了密码子偏好的问题，并且表达的蛋白可正常折叠。

myTXTL 产品系列

Sigma 70 Master Mix
基于E.coli的裂解液，Ready-to-Use预混液，适用于微量反应体系（12 L），根据需求反应体系可适度增大。

GamS Nuclease Inhibitor
在myTXTL Sigma 70预混液中添加GamS，能有效提高线性DNA模板的蛋白质产量。

Linear DNA Expression Kit
以线性DNA为模板的无细胞蛋白质表达体系。具有高效表达可溶蛋白和膜蛋白的能力，不需要添加额外的稳定剂。

性能数据：

Effect of plasmid concentration on in vitro protein production. deGFP expression is regulated by the interaction of the endogenous E. coli core RNA polymerase and the primary sigma factor 70 ( 70 ) with the 70- specific promoter P70a.

Protein synthesis in myTXTL using the T7 expression system. deGFP expression under the control of the bacteriophage T7 promoter (PT7) is facilitated by initial expression of T7 RNA polymerase from an additional plasmid.

参考文献：

 Watters KE. et al. (2018). Systematic discovery of natural CRISPR-Cas12a inhibitors. Science. doi:10.1126/science. aau5138.

 Marshall R. et al. (2018). Rapid and scalable characterization of CRISPR technologies using an E. coli cell-free transcrip-tion-translation system. Molecular Cell. doi:10.1016/j.molcel.2017.12.007.

 Rustad M. et al. (2018). Cell-free TXTL synthesis of infectious bacteriophage T4 in a single test tube reaction. Synthetic Biology. doi: 10.1093/synbio/ysy002.

 Garamella J. et al. (2016). The all E. coli TX-TL toolbox 2.0: a platform for cell-free synthetic biology. ACS Synth Biol. doi: 10.1021/acssynbio.5b00296.

基于大肠杆菌的无细胞快速蛋白表达系统：myTXTL无细胞体外蛋白表达系统（Arbor Biosciences中国代理）

myTXTL 体外蛋白表达系统由美国Arbor Biosciences公司自主研发。Arbor Biosciences是起源于美国密歇根大学的高科技生命科学公司，公司的核心技术是低成本的核酸探针合成技术与合成生物学技术。广泛应用于生物芯片、靶向捕获测序和蛋白质体外表达。为客户提供创新性的基因组学与合成生物学解决方案。客户遍及亚洲、美洲和欧洲。学术期刊Nature、Science、PNAS均刊登过由该公司产品支撑的学术论文。

Arbor Biosciences主要产品
myBaits 捕获试剂盒：能够进行生物素标记的RNA探针定制与合成；也具有即用型探针。用于全基因组富集、特异性线粒体基因组捕获和超保守元件类群共享序列捕获试剂盒等。
myTags FISH文库：FISH探针定制，Immortal文库制备。
myTXTL Cell-Free 蛋白表达试剂盒：以质粒或线性DNA为模板的体外蛋白表达系统。
myReads ：NGS捕获实验项目一站式服务。
myArray ：Microarrays定制。
myCRISPR ： myCRISPR 技术对 DNA和RNA产品进行高质量、低成本精准编辑。
myDNA ：无错DNA生物合成。
myLib ：定制双链DNA文库。
Arbor Biosciences不断创新方法，通过新产品的开发和应用，助力生命科学与医学的不断发展。